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• Production in vitro d'anticorps monoclonaux (IgG de souris,IgG de rat, ou IgG humanisés ou "fully human")
(Flasques ou Rollers)
Depuis plusieurs années, RD-Biotech a développé un savoir faire dans la production in vitro d’anticorps monoclonaux. La production en ascites, toujours autorisée en France est reconnue comme très pénible pour les animaux et elle peut aujourd’hui être avantageusement remplacée par la production in vitro.
Avec son unité de production in vitro, RD-Biotech propose des technologies alternatives à un coût équivalent aux productions en ascites et ce avec une reproductibilité et une qualité de pureté bien supérieures aux productions en ascites.
Lorsque le client confie son clone à RD-Biotech (flasques ou cryotubes) pour une production in vitro, il n’est pas nécessaire de préciser la spécificité du clone, ce qui garantit la confidentialité envers le client.
Les différentes étapes d’un projet de production d’anticorps in vitro sont les suivantes :
Le client fournit le clone accompagné d’une fiche technique dans laquelle seront précisés le milieu de culture, la nature et l’isotype de l’anticorps. L’hybridome peut être adapté à différents milieux de culture (sérum déplété en IgG bovines, milieu sans sérum…)
Pour de grandes quantités d’anticorps monoclonaux à produire (au-delà de 100 mg, RD-Biotech propose une évaluation de la productivité sur de petits volumes.
A l’issue de cette faisabilité, le client reçoit un rapport indiquant la productivité obtenue in vitro et un devis précis et ferme pour la phase production. Il peut recevoir également l’anticorps pour l’évaluer avant de commander la phase production in vitro.
RD-Biotech démarre ensuite la phase production in vitro sur des volumes pouvant aller de 1 litre à plus de 100 litres de surnageant de culture, ce qui permet de produire de quelques mg à plusieurs grammes d’anticorps in vitro.
- Suivi de production :
Grâce aux kits de dosage des IgG de souris, IgG de rat et IgG humaines développés et commercialisés par RD-Biotech, nous pouvons suivre la production des anticorps dans le surnageant de culture afin d’estimer très rapidement la quantité de surnageant à produire pour atteindre l’objectif défini.
- Purification :
Le surnageant produit peut être ensuite concentré jusque 15 fois par ultrafiltration tangentielle avant de procéder à la purification de l’anticorps monoclonal. La purification de l’anticorps monoclonal est réalisée par chromatographie d’affinité sur Protéine A ou Protéine G selon l’origine ou l’isotype du clone.
Dans le cas d’immunoglobulines M, la purification est réalisée par chromatographie échangeuse d’ions.
En option, l’anticorps produit in vitro peut être purifié en conditions Endofree, ce qui nécessite l’usage de tampons et contenants apyrogènes.
Après l’étape de chromatographie d’affinité, la pureté de l’anticorps peut être améliorée par une étape de chromatographie d’échange d’ions, qui élimine également les endotoxines éventuellement présentes.
Les anticorps monoclonaux produits in vitro par RD-Biotech en conditions Endofree ont un taux d’endotoxines inférieur à 1 EU/mg.
Les anticorps monoclonaux produits in vitro peuvent être livrés au client après concentration et équilibrage dans le tampon de son choix.
- Contrôle Qualité :
Les anticorps monoclonaux produits in vitro par RD-Biotech sont livrés avec un rapport de contrôle qualité incluant un contrôle par électrophorèse (SDS-PAGE) un dosage des protéines totales (Lowry) et éventuellement un test LAL qui permet de déterminer le taux d’endotoxines bactériennes.
Le test LAL (Limulus Amebocyte Lysate) est réalisé à l’aide d’un kit réglementaire selon le protocole du fournisseur.
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• Production d'anticorps monoclonaux en ascites
Lorsque la production d’IgG in vitro s’avère difficile, ce qui est très rare avec le savoir faire en culture cellulaire de RD-Biotech, nous proposons la production en ascites à partir de 5 souris par hybridome. |
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