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RD-BIOTECH

3 rue Henri Baigue

F-25000 Besançon

+33(0)3 81 53 88 37

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Biotech Investissement

RD-BIOTECH, DIACLONE et SYNABS au sein d’un même groupe pour une plus grande synergie dans le domaine des anticorps monoclonaux !

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Biologie Moléculaire

Vous souhaitez constituer une bio banque de matériels biologiques ADN, ARN ?
Vous souhaitez produire rapidement vos plasmides ?
Vous souhaitez construire un vecteur sur mesure ?
Vous souhaitez produire une protéine pour laquelle vous n'avez pas le gène ?
Ou alors vous souhaitez exprimer une protéine et vous fournissez le vecteur ?

RD-Biotech propose tout un panel de services sur mesure sur sa plate-forme de biologie moléculaire.
En vous adressant à RD-Biotech vous allez :
- gagner du temps tout en vous consacrant à vos axes majeurs de recherche à haute valeur ajoutée
- pouvoir bénéficier de notre expertise scientifique et technique en biologie moléculaire

PRODUCTION DE PLASMIDES

Au cours de ces dernières années, l’activité de production et purification de plasmides est devenue l’une des activités majeures de Bioproduction à RD-Biotech.
Avec plus de 600 plasmides chaque année, nous avons développé une expertise sans égal dans la production de plasmides, pour des applications en recherche ou des études précliniques.
Que vous souhaitiez 1 mg d’ADN pour une étude en R&D ou 500 mg «endofree» pour des applications in vivo, notre but est de répondre à votre demande, en termes de quantité, de qualité et de délais.

RD-Biotech est en mesure de fournir des lots de 10 mg en 3 jours, des lots de 100 mg en 6 jours !

- Qualité «Endofree» : nous garantissons un niveau d’endotoxines inférieur à 0,1 EU / µg d’ADN
- Homogénéité des lots produits (plus de 90% Forme super-enroulée)
- Grande capacité de production : de quelques milligrammes jusqu’à plusieurs grammes par plasmide. QUANTITE GARANTIE !
- Délais très courts
- Production de plasmides à partir de l’ADN ou d’étalements bactériens
- Contrôles Préproduction et Postproduction (sélection du clone à amplifier, analyse du profil de restriction, quantification)
- Possibilité de gardiennage sécurisé pour des productions de plasmides récurrentes
- Autres services liés :

* Transformation bactérienne
* Ajustement à la concentration d’ADN souhaitée
* Filtration
* Aliquotage
* Dosage des endotoxines bactériennes (test LAL / Limulus Amebocyte Lysatel)
* Tests de stérilité, ….


Applications

- Transfection en cellules de mammifères
- Etudes in vivo (injection chez l’animal)
- Etudes précliniques
- Etudes de toxicologie
- Applications en Recherche & Développement

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PREPARATION D’ARN

Préparation et purification d’ARN à partir de différents échantillons biologiques (sang, culots cellulaires, biopsies…) pour des applications en recherche ou des études précliniques.
La procédure d’extraction, de purification et de contrôle des ARN totaux est optimisée en fonction du matériel biologique de départ.

1. Préparation des ARN à partir de cellules en culture
2. Préparation des ARN à partir de tissus
3. Préparation d’ARN à partir de sang total, de PBMC, de plaquettes, …
4. Préparation d’ARN à partir de plantes…

- Plate-forme automatisée pour la préparation d’ARN totaux ou méthode manuelle d’extraction et purification des ARNs

- Extraction des ARN de sang total selon la technologie PAXgene ®

- Grande capacité de production : préparation par série de 50 à 200 échantillons

- Possibilité de conservation des préparations d’ARNs (gardiennage sécurisé) pour des utilisations ultérieures (Rétro-transcription, …)

- Contrôles qualité :

*Contrôle de l’intégrité des ARNs par mesure du RIN « RNA Integrity Number »
*Dosage des ARN totaux par mesure d’absorbance au Nanodrop®

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PREPARATION D’ADN GENOMIQUE

Préparation et purification d’ADN génomique à partir de différents échantillons biologiques (sang, culots cellulaires, biopsies…) pour des applications en recherche ou des études précliniques.
La procédure de préparation et de contrôle des ADN est optimisée en fonction du matériel biologique de départ.

1. Préparation d’ADN à partir de sang total, de sérum, de PBMC, …
2. Préparation d’ADN à partir de cellules en culture
3. Préparation d’ADN à partir de plantes…

- Plate- forme automatisée pour la préparation des ADN génomiques

- Extraction des ADN de sang total selon la technologie PAXgene ®

- Grande capacité de production, avec possibilité de traitement par série de 50 à 200 échantillons.

- Possibilité de conservation les préparations d’ADN (gardiennage sécurisé) pour des utilisations ultérieures (PCR, clonage, …)

- Contrôles qualité :

*Dosage des ADN par mesure d’absorbance au Nanodrop®
*Contrôle des ADN sur gel agarose

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CONSTRUCTION DE VECTEURS

RD-Biotech peut prendre en charge la construction de vos vecteurs d’expression pour des applications en système procaryote ou eucaryote.

Notre équipe de spécialistes en biologie moléculaire définit avec vous la meilleure stratégie en fonction de votre cahier des charges.

Service de clonage :

- Par étapes : Chaque projet est composé d’étapes successives, chaque étape réalisée étant validée par le client avant de passer à l’étape suivante (GO / NO GO), pour plus de souplesse et de sécurité.
- Service à façon : Chaque projet est personnalisé afin de répondre au mieux aux besoins de nos clients : optimisation de la séquence, stratégie de clonage, choix du vecteur …
- Suivi personnalisé : Un responsable de projet dédié pour chaque projet, afin d’assurer un suivi constant et afin d’apporter de la réactivité dans le déroulement du projet de clonage.
- Confidentialité.

Préparation de la séquence :

- Design de la séquence d’intérêt
- Optimisation en fonction du système d’expression et des applications (ajout d’étiquette, séquences de promoteur, insertion de séquences de clivage particulières, …)
- Clonage en vecteur navette
- Contrôle par séquençage

Clonage standard :

- Restriction enzymatique et purification de l’insert
- Ligature et transformation de cellules bactériennes E. Coli
- Criblage des colonies
- Contrôles : Quantification et contrôle du profil de restriction par électrophorèse en gel d’agarose
- Production plasmidique d’une centaine de µg d’ADN (MidiPrep)
- Contrôle des jonctions par séquençage

Procédures de clonage adaptées :

- Mutagenèse
- Sous clonage par PCR : amplification génique, purification et contrôles des produits PCR
- Contrôle par séquençage complet de l’insert

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EXPRESSION ET PURIFICATION DE PROTEINES RECOMBINANTES

Grâce à son équipe pluridisciplinaire, RD-Biotech propose une plate-forme globale de la préparation du vecteur jusqu’à l’expression et la purification des protéines recombinantes.
Nous pouvons proposer des prestations standards mais aussi des stratégies sur mesure adaptées à votre cahier des charges. Nos experts sont à votre écoute afin de proposer la meilleure des stratégies, pour optimiser le développement de votre projet, en terme de délais et de coût.
RD-Biotech peut prendre en charge tout ou partie du projet, qui peut se décliner selon les étapes suivantes :

1. Service d’expertise : prise en charge du projet qui peut inclure une analyse scientifique et technique de la bibliographie, l’étude de configuration de séquences, analyse de prédisposition d’expression de la protéine, biologie structurale

2. Construction du vecteur d’expression

3. Etude de faisabilité : pilote d’expression et pilote de purification, tests de différentes conditions d’expression (évaluation de différentes souches ou lignées cellulaires en parallèle, test de différents milieux de culture, conditions de température, …) : détermination des conditions optimales et du rendement d’expression, analyse des résultats et fourniture d’un rapport GO / NO GO du client

4. Lancement de la production et purification de la quantité souhaitée

5. Fourniture du lot de protéine purifiée accompagné du rapport de production / purification et des contrôles qualité


NOTRE SERVICE

- NOUVEAU : Système d’expression in vitro « Cell free »

> Vecteur optimisé pour ce système acellulaire
> Capacité de production jusqu’à plusieurs grammes
> Les avantages :
       Procédé In Vitro
       Meilleur folding des protéines
       Expression de protéines solubles ou membranaires
       Permet l’expression de protéines toxiques pour les cellules
       Pas d’étape d’optimisation de codons
       Système ouvert

- Système d’expression PROCARYOTE : Bactéries E.Coli :

> Etude pilote basée sur des volumes de culture de quelques dizaines de ml
> Contrôle des protéines induites sur gel SDS-PAGE
> Contrôle par Western-Blotting (anticorps anti-tag ou anticorps spécifique)
> Purification des protéines par affinité
> Capacité de production en scale up : pour des lots Recherche (lots de quelques mg jusqu’à plusieurs centaines de mg)

- Système d’expression EUCARYOTE : Cellules de mammifères (CHO, HEK, ...) :

> Large expertise sur de nombreuses lignées cellulaires : cellules adhérentes et cellules en suspension
> Etude pilote en flasques ou en plaques de culture sur de petits volumes de culture
> Evaluation de l’expression de la protéine par transfection transitoire
> Contrôle des protéines exprimées : Western-Blotting, ELISA, cytométrie de flux…
> Dans le cas d’expression d’anticorps recombinants (humains, chimériques, …) : contrôle de productivité à l’aide du kit FastELISA de RD-Biotech : dosage des immunoglobulines G humaines dans le surnageant de culture
> Purification des protéines : selon différents systèmes dépendant de la protéine (purification par chromatographie d’affinité,... )
> Contrôle par Western-Blotting (anticorps anti-tag ou anticorps spécifique) et gel SDS-PAGE
> Capacité de production en scale up :

* de quelques ml jusqu’à plusieurs centaines de litres de surnageant par lot
* de quelques millions jusqu’à plusieurs milliards de cellules par lot

> Constitution de banques de cellules

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SEQUENCAGE D’ANTICORPS MONOCLONAUX

NOUVEAU ! RD-Biotech a mis en place une plate-forme de séquençage d’anticorps monoclonaux.

Pplate-forme de séquençage d'anticorps monoclonaux

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TRANSCRIPTION IN VITRO

Plate forme de transcription in vitro pour la génération de vos ARNs, à partir de vos plasmides ou de vos produits PCR

> Transcrits sens ou anti-sens
> Transcrits marqués ou non marqués
> Transcrits cappés et/ou poly-adénylés

- Préparation du matériel biologique :

- ADN plasmidique :

Amplification du plasmide afin d’obtenir la quantité souhaitée
Contrôles qualité : Quantification par Nanodrop® et électrophorèse
sur gel d’agarose après digestion enzymatique

- Produits PCR :

Clonage dans un vecteur avec promoteur d’intérêt (T7, SP6…)
Contrôle par séquençage
Amplification et purification de l’ADN plasmidique – Contrôles qualité

- Linéarisation du plasmide par restriction enzymatique.
- Purification de l'ADN linéarisé.
- Quantification par spectrophotométrie et contrôle par électrophorèse en gel d'agarose.
- Transcription in vitro selon la procédure définie (transcrits sens ou anti-sens).
- Pilote sur 1 μg ADN puis transcription de la totalité de l’ADN fourni.
- Purification des transcrits et contrôles.
- Quantification de l'ARN obtenu et contrôle par électrophorèse sur gel d'agarose en conditions dénaturantes.
- Contrôle de l’intégrité des ARNs par mesure de RIN sur BioAnalyser (Agilent).

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PCR ET PCR EN TEMPS REEL

RD-Biotech peut répondre aux différentes problématiques liées à la quantification de gènes, à l’étude d’expression de gènes, à l’analyse de l’expression de différents variants d’un gène, à l’identification de séquences spécifiques…



> Plate-forme de PCR et RT-PCR classique :

- Mise au point des conditions opératoires ou application d’une procédure validée par vos soins
- Réalisation des amplifications
- Possibilité de contrôler les produits PCR par séquençage.
- Analyse des résultats et fourniture d’un rapport complet
- Possibilité de préparer les échantillons avant analyse



> Plate-forme de PCR en temps réel :

La réaction en chaîne par polymérase en temps réel est une technique ayant de nombreuses applications, basée sur une réaction enzymologique, la PCR et sur la mesure en continu de son produit. À chaque cycle d’amplification, la quantité d’ADN total ou d’amplicon est mesurée grâce à un marqueur fluorescent. L’obtention de la cinétique complète de la réaction de polymérisation permet ainsi d’obtenir une quantification absolue de la quantité initiale d’ADN cible.

- Mise au point des conditions opératoires ou application d’une procédure validée par vos soins
- Quantification absolue et Quantification relative
- Procédure SyberGreen® ou TaqMan®


Mise au point de méthode qPCR : RD-Biotech propose dans un premier temps une phase de faisabilité qui sera suivie, après validation par le client, de la rédaction d’une procédure et de réalisation des analyses en série.

1 - Phase de faisabilité
- Etude bibliographique avec analyse des données de la littérature
- Analyse informatique de la séquence ou des séquences d’intérêt.
- Design et conception des amorces
- Détermination des gènes de contrôles
- Mise au point de la méthode de PCR en temps réel
- Réalisation des amplifications sur un nombre limité d’échantillons
- Analyse des résultats et rédaction d’un rapport.

2 - Phase d’analyses en routine
NOTE : La quantité et la qualité des échantillons fournis sont sous la responsabilité du client.

RD-Biotech peut prendre en charge la préparation des échantillons ADN et ARN à partir de différents matériels biologiques



> Plate-forme de PCR ou qPCR en routine

- Réalisation d’analyses en routine selon des procédures validées. Ex : Détection de mycoplasmes par PCR

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AUTRES SERVICES

Notre équipe commerciale ainsi que nos experts scientifiques et techniques sont à votre écoute pour vous proposer le service adapté à votre
demande !

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PRODUCTION DE PLASMIDESPRODUCTION DE PLASMIDESPRODUCTION DE PLASMIDESPREPARATION D'ARNPREPARATION D'ARNPREPARATION D'ARNCONSTRUCTION DE VECTEURSEXPRESSION ET PURIFICATION DE PROTEINES RECOMBINANTESEXPRESSION ET PURIFICATION DE PROTEINES RECOMBINANTESTRANSCRIPTION IN VITROPCR ET PCR EN TEMPS REELPCR ET PCR EN TEMPS REEL